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索莱宝通用RT-PCR试剂盒(AMV)

品名: 索莱宝通用RT-PCR试剂盒(AMV)
型号: 暂无
  • 产品详情
  • 规格参数

产品简介

货号:RP1200
规格:50T/100T
保存:-20℃保存,避免反复冻融,复检期为 1 年。
产品内容:
试剂盒组成 50 次 100 次
AMV(10U/ul) 25ul 50ul
5×AMV Buffer(含 DTT) 250ul 500ul
Oligo(dT)16(10uM) 250ul 500ul
RNasin(40U/ul) 25ul 50ul
dNTPs(10mM) 200ul 400ul
Taq Polymerase(5U/ul) 25ul 50ul
10×PCR Buffer 250ul 500ul
RNase-free ddH2O 1ml 2ml
说明书 1 份 1 份
产品简介:
本试剂盒适用于各种 RNA 制品的反转录反应以及随后的 PCR 扩增。它采用 AMV 进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在 25ul 反转录体系和 50ul PCR 反应体系中,还可以一次性得到足够量的 PCR 产物用于后续的克隆实验。
本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT 酶采用进口的 AMV,所以 cDNA 更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的 RNase 抑制剂可有效降低由于外源 RNase 污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于 cDNA 克隆及目的基因检测等分
子生物学实验。
操作步骤:
一、反转录反应
1、在冰浴的无菌无 RNase 的离心管中加入如下反应成分:
0.5ug RNA 模板
5ul Oligo(dT)16引物
补 RNase-free ddH2O 至 11.5ul
2、70℃保温 5min 后迅速在冰上冷却 5min,简短离心收集反应液后加入以下各组分:
5ul 5×AMV Buffer
2.5ul dNTPs
0.5ul RNasin
0.5ul AMV
补 RNase-free ddH2O 至 25ul
3、42℃温浴 60min,如果是用随机引物,请将离心管置 37℃温浴 60min。

4、反应后将离心管置冰上,反应产物可用于进行后续实验或-20℃保存。
二、PCR 反应
1、按以下各组分配制 50ul PCR 反应体系:
10×PCR Buffer 5ul
dNTPs 1ul
上游引物(用户自备 10um) 1ul
下游引物(用户自备 10um) 1ul
RT 反应产物 2ul
Taq Polymerase 0.5ul
ddH2O x ul
Total Volume 50ul
2、混匀后短暂离心,PCR 仪扩增,琼脂糖凝胶电泳观察结果。
注意事项:
1、用于 cDNA 合成反应的相关试剂和耗材尽可能用 DEPC 进行处理,并在高压灭菌后使用。
有些试剂不能高压灭菌时,首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后,再将溶液进行过滤除
菌处理。
2、RNA 样品要避免反复多次冻融,应使 RNA 在冰浴中处于融化状态。
3、如果 PCR 效果不理想,可以适当优化条件,比如改变退火温度或增加模板量。

产品参数

储存条件:-20℃,有效期1年

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